提高鼠肿瘤浸润性T细胞的频率和效应

　　尚不明确负责黑色素瘤中联合检查点阻断治疗成功的免疫机制，但可能涉及肿瘤浸润淋巴细胞数量增加和功能增强。为了确定免疫检查点封锁免疫疗法是通过免疫细胞促进肿瘤浸润还是调节细胞的缺失，在肿瘤注射后第16天，对已建立的黑色素瘤中的肿瘤浸润淋巴细胞群体进行定量。为了确保在这个简短的时间点有足够大的肿瘤以进行足够的肿瘤浸润淋巴细胞分离，将免疫检查点封锁计划表略微延迟，以便在免疫治疗之前为肿瘤的生长留出更多时间。在此，相对于肿瘤发生，在第8、11和14天用免疫检查点封锁或磷酸盐缓冲液治疗小鼠，并在第16天处死小鼠。此时，有在自然杀伤细胞或CD4的频率没有可检测的变化+Foxp3+调节性T细胞的免疫检查点封锁后。免疫组织化学证实增加CD8+免疫后肿瘤浸润淋巴细胞，将其广泛应用于整个肿瘤组织所示。这些数据表明，效应CD4+CD8+T细胞可能是这种联合免疫检查点封锁方案引起的抗肿瘤免疫的原因。
　　 T细胞在控制肿瘤进展中起作用，但需要分化并获得效应子功能以介导治疗作用。效应CD4+T辅助1细胞和细胞毒性T细胞都是重要的效应分子产生的重要分子，这些分子是抗肿瘤免疫力所必需的。由于联合用免疫检查点封锁可以增强对黑素瘤进展的控制，与增加的T细胞频率相对应，因此出国看病服务机构确定免疫疗法是否还可以提高不同肿瘤浸润淋巴细胞人群的功能。植入黑素瘤肿瘤，并在第8、11和14天用免疫检查点封锁治疗受体小鼠。在第16天，通过流式细胞术测量肿瘤浸润淋巴细胞中细胞内细胞因子和效应分子的表达。相对于用磷酸盐缓冲液治疗的小鼠，接受免疫疗法的小鼠具有更高的多功能CD8+和CD4+频率在离体再刺激后，肿瘤浸润淋巴细胞以及产生干扰素γ和自然杀伤细胞。这些CD8+和CD4+肿瘤浸润淋巴细胞也产生更多的干扰素γ每个细胞相对于那些从磷酸盐缓冲液处理的小鼠的基础上通过增加的平均荧光强度的干扰素γ染色。另外，CD8+从与免疫检查点封锁治疗的接受者肿瘤浸润淋巴细胞证明GZMB直接离体。这些结果表明，联合用免疫检查点封锁进行免疫治疗可促进已建立的黑色素瘤肿瘤内效应T细胞的积累。
　　 检查点封锁免疫治疗已显着提高患者的黑色素瘤的结果。随后的联合阻断方法已使这种临床成功扩大到更大比例的患者，在一半以上接受治疗的患者中引起了长期的总体存活率。然而，对治疗期间可操作的免疫机制的全面了解尚不清楚。对人黑素瘤肿瘤浸润淋巴细胞的分析显示，细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4和程序性死亡受体1可能在抑制免疫功能中发挥不同的作用，并且在免疫治疗期间对这些分子的阻断会诱导独特的CD4+和CD8+T细胞亚群的扩增。这些个体亚群的扩增是否改变了肿瘤浸润性T细胞的多样性，以及这是否有助于抗肿瘤免疫，尚待确定。
　　 肿瘤反应性T细胞的多样性是否影响患者预后仍然是一个有争议的话题。在一项针对42例前列腺癌患者的临床研究中，抗细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4的治疗在反应性和非反应性患者群体中均导致外周血T细胞克隆型的适度多样化，并与免疫相关的不良事件相关。在黑色素瘤患者中，具有更高克隆性质的CD4+和CD8+肿瘤浸润淋巴细胞更高的密度与对程序性死亡受体1阻断的更好反应相关。相比之下，尽管评估了对整体存活率没有影响，但评估了使用伊立木单抗治疗的一小组黑色素瘤患者相关的肿瘤浸润淋巴细胞多样性具有一定的临床益处。因此，迄今为止，临床反应一直是不一致的并且难以解释。
　　 为了深入了解检查点封锁免疫疗法如何影响T细胞浸润性肿瘤的广度，出国看病服务机构探索了B16鼠黑素瘤模型中的肿瘤浸润淋巴细胞多样性。B16肿瘤具有特征鲜明的突变格局，是广泛的新抗原特异性T细胞识别所必需的。用组合检查点封锁免疫疗法治疗荷瘤小鼠会随着时间的推移显着缩小肿瘤，这反映出针对癌症的免疫反应得以改善。实际上，接受免疫疗法治疗的受体在肿瘤内显示CD4+和CD8+T细胞频率升高，并且这些T细胞显示效应分子表达增加，表明功能增强。
　　 由于这些肿瘤浸润淋巴细胞人群在免疫治疗后会扩大，因此出国看病服务机构预计这些亚群的多样性也将受到影响。要么由于少量肿瘤反应性T细胞的克隆扩增而减少，要么由于大量内源性T细胞的激活和浸润而增加。但是，对肿瘤微环境中所有T细胞受体β链的编码基因进行测序后发现，对免疫疗法作出反应的T细胞总体多样性没有明显变化。这与先前在B16黑色素瘤肿瘤浸润淋巴细胞中的研究相一致，在该研究中，放射疗法诱导了更广泛的T细胞受体组成，但并未因添加检查点封锁抗体而改变。在出国看病服务机构的研究中，肿瘤浸润淋巴细胞的T细胞受体β库的分析揭示了多样化的异质T细胞群体。出国看病服务机构没有在肿瘤浸润淋巴细胞T细胞受体谱库中发现任何先前发表的肿瘤抗原特异性克隆型。这不是特别令人惊讶，因为T细胞受体库是大大多样化和抗原特异性的多个个体之间共享T细胞受体克隆型只占小百分比的。对黑色素瘤反应性T细胞受体克隆型的更集中评估显示，无论采用何种免疫疗法，肿瘤浸润淋巴细胞中预测的Gp100特异性T细胞受体的分布范围都很大。但是，这些数据仅限于针对单个黑色素瘤抗原的非常小的T细胞受体子集。随着技术的发展允许从高变体互补决定区域3测序数据更准确地预测T细胞受体特异性，将有可能对检查点封锁如何影响肿瘤反应性肿瘤浸润淋巴细胞进行更全面的评估。
　　 出国看病服务机构的结果表明，成功的鼠B16黑色素瘤免疫疗法不需要新的T细胞具有更宽的特异性浸润肿瘤，因为扩增后T细胞特异性的广度与扩增前的T细胞特异性基本相同。这一结论与另一项研究相吻合，在该研究中，即使使用成功的抗程序性死亡受体1或4-1BB免疫疗法联合治疗，整个肿瘤组织中T细胞受体的多样性指数也没有改变。相反，在用低效抗4-1BB单一疗法治疗的小鼠中观察到肿瘤浸润淋巴细胞多样性增加，该疗法无法控制黑素瘤肿瘤的生长。连同出国看病服务机构的研究，这些数据提出了有关肿瘤浸润淋巴细胞多样性作为治疗成功的预测因素或驱动因素的问题。出国看病服务机构研究的结果还表明，成功的免疫疗法不依赖于某些T细胞克隆的选择性扩增，而是诱导大多数肿瘤浸润T细胞相对均匀地扩增，从而使整体肿瘤浸润淋巴细胞多样性不受影响。由于Foxp3+调节性T细胞在治疗过程中并未扩增，因此种群多样性的稳定性不足为奇，但是据出国看病服务机构所知，这是肿瘤浸润性调节性CD4中T细胞受体β链多样性的首次报道。当然，出国看病服务机构在这里的观察仅限于一种特定的鼠类黑色素瘤模型。免疫疗法在人类癌症患者中的成功是否也独立于肿瘤浸润淋巴细胞多样性的变化尚待确定。不同的治疗方法和不同的癌症可能会得出新的结论。