用卡尺测量两个垂直直径，并使用公式计算肿瘤体积，其中a和b分别为较大和较小的直径。每2天评估一次肿瘤体积。两名独立研究人员评估了随时间推移的肿瘤体积，其中一名研究人员对治疗组的工作不了解。平均肿瘤生长曲线的统计学差异通过使用时间和体积变量的双向方差分析确定。使用方法确定每组的生存差异.
将细胞在冰上温育45分钟，并用染色缓冲液洗涤两次。将细胞固定并使用250固定烫发缓冲液过夜通透或通透50分钟。第二天早上，将细胞在冰洗液中以1:75稀释的100抗体在冰上染色45分钟，用染色缓冲液洗涤2次，然后在流式细胞仪上读数。使用流式细胞仪软件10版进行分析。
荧光免疫组织化学研究：对小鼠的治疗与在T细胞表型分析中相同。将组织在10％福尔马林中固定72小时，然后转移到70％乙醇中。将载玻片去石蜡，置于甲醇中的10％过氧化氢中30分钟，然后在去离子水中轻轻冲洗。使用小鼠抗对石蜡标本进行的免疫荧光分析。在100°C的条件下，使用基于的缓冲液在组织载玻片上进行抗原提取72分钟，在室温下用蛋白质块封闭20分钟。在室温下将载玻片置于过氧化氢阻断作用下8分钟，然后先在抗稀释液中于室温孵育4小时，然后在室温下将二抗孵育44分钟，使用。然后对载玻片进行95°C孵育12分钟的抗体变性步骤。
免疫疗法包括在利用人体自身免疫系统以产生抗肿瘤响应，处理完成后，其经常持续，提示调制和免疫系统的变形例的作用。最常用的策略是调节免疫检查点，尤其是细胞毒性T淋巴细胞相关分子4，程序性细胞死亡受体1或程序性细胞死亡配体1，尽管有新的抑制作用和刺激性途径也已成为目标。不幸的是，免疫检查点治疗的一些局限性值得关注，其中包括反应异质性，其中一些患者达到了完全反应，而其他患者则没有。此外，由于其他的免疫逃逸机制可能导致肿瘤复发，并且缺乏最佳的生物标记来预测反应和毒性。其他主要问题是新的不良事件和自身免疫样反应的出现，以及与这种疗法有关的费用。因此，正在研究与操纵免疫检查点不同的方法，并将其作为本综述的重点。具体来说，出国看病服务机构讨论了I或II期临床研究中的分子，包括共轭单克隆抗体，嵌合抗原受体T细胞，溶瘤病毒，疫苗，以及其他正在研究的基于免疫的方法。没有包括处于更高级研究阶段的人员。总结了将要讨论的不同策略，出国看病服务机构列出了这些代理的摘要。目前正在开发一系列针对肿瘤特异性抗原的单克隆抗体。这些可以结合特定的肿瘤抗原，停留在表面上并激活抗体或补体依赖性细胞毒性或影响下游信号。单克隆抗体通过不同的机制促进肿瘤杀伤，包括通过诱导凋亡，受体阻滞或激动剂活性，细胞毒性剂的递送，辐射，免疫介导的细胞杀伤或通过对肿瘤脉管和间质的特异性作用直接杀伤细胞。特别感兴趣的是最近开发的双特异性抗体，其结合了对肿瘤细胞和效应免疫细胞的抗原结合特异性。
尽管嵌合抗原受体-T细胞疗法在早期取得了成功，尤其是在血液系统恶性肿瘤中，但嵌合抗原受体-T细胞疗法的大规模临床应用可能受到个性化制备和各种副作用，例如细胞因子释放综合征，神经毒性和靶点或肿瘤外效应。鉴于这些问题，已提出自然杀伤细胞是T细胞优良嵌合抗原受体驱动程序。具体而言，与T细胞相比，自然杀伤细胞在基于嵌合抗原受体的免疫治疗中具有多个优势。
首先，表达嵌合抗原受体的自然杀伤细胞在临床使用中可能比嵌合抗原受体-T细胞更安全，并且自然杀伤细胞免疫疗法的安全性已在多个临床领域得到证实。例如，一些I或II期临床试验表明，异体自然杀伤细胞输注的耐受性良好，不会导致移植物抗宿主病和严重的不良反应;因此，自然杀伤细胞是通用的嵌合抗原受体驱动程序，不仅限于自体细胞。由于嵌合抗原受体-T细胞的持久性，嵌合抗原受体-T细胞疗法的主要副作用之一是靶向或非肿瘤效应。例如，靶向的嵌合抗原受体-T细胞可能会由于T细胞的细胞记忆反应以及正常成熟或祖细胞B的侵袭而引起严重且持久的B细胞缺乏症。幸运的是，嵌合抗原受体-自然杀伤细胞在循环中的寿命有限，几乎没有靶向非肿瘤效应。此外，自然杀伤细胞产生的细胞因子类型与T细胞产生的细胞因子类型不同。活化的自然杀伤细胞通常会产生因子，而嵌合抗原受体-T细胞诱导的细胞因子风暴主要由促炎性细胞因子介导。
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