树突状细胞疫苗疗法是一种肿瘤免疫疗法

　　树突状细胞疫苗疗法是一种肿瘤免疫疗法，其中树突状细胞通过肿瘤特异性抗原在体外被激活，然后被注入体内。结果，启动了抗原特异性免疫反应，并诱导了细胞毒性T淋巴细胞反应杀死肿瘤细胞肿瘤相关抗原，自体肿瘤细胞抗原或肿瘤细胞裂解物可被树突状细胞捕获并激活抗原交叉呈递途径，然后载有抗原的树突状细胞可在体内诱导抗原特异性免疫反应。但是，大多数肿瘤抗原属于自身蛋白成分，对成熟的树突状细胞缺乏免疫刺激活性。仅由这些抗原致敏的树突状细胞疫苗可能仅产生微弱的免疫反应，不足以杀死肿瘤细胞。专家分析了树突状细胞疫苗在小鼠癌症症状模型中的治疗效果，他们认为需要适当的佐剂来成熟树突状细胞并改善树突状细胞疫苗的活化。分析了总共906名患者中树突状细胞疫苗治疗前列腺癌和肾细胞癌的29项临床试验。分析发现，54％的前列腺癌患者受益于树突状细胞疫苗治疗，48％的肾细胞癌患者受益于该治疗。他们得出结论，剂量，细胞成熟度和树突状细胞的亚型对前列腺癌的治疗有很大影响，他们认为树突状细胞疫苗的未来发展应更多地关注树突状细胞疫苗的组成和细胞的成熟阶段。树突状细胞。因此，需要适当的免疫佐剂与肿瘤抗原协同作用以激活树突状细胞成熟并诱导强烈的抗肿瘤反应。
　　 常用的树突状细胞成熟剂是促炎细胞因子，例如肿瘤坏死因子和前列腺素E2，细菌类毒素，例如鞭毛蛋白，以及Toll样受体激动剂，例如脂多糖。基于蛋白质的佐剂一般是来自天然来源，如霍乱毒素和卡介苗疫苗，其可以衰减之后被开发作为佐剂毒素。然而，此类佐剂可与肿瘤抗原竞争以呈递至主要组织相容性复合物上并诱导针对佐剂抗原的免疫应答。相反，基于天然多糖的佐剂具有弱的免疫原性，不仅具有免疫调节特性，而且具有生物相容性，生物可降解性，低毒性和安全性的优点，这使得多糖佐剂在疫苗制剂中具有吸引力。在这种制剂中，多糖佐剂可增强疫苗的免疫反应，并促进特异性和非特异性免疫，细胞免疫，体液免疫和粘膜免疫。此外，多糖被抗原呈递细胞上的模式识别受体识别为病原体相关分子模式，从而触发先天免疫反应，从而具有佐剂作用。例如，来自不同的来源，例如香菇多糖，β葡聚糖粪产碱杆菌，激活先天免疫主要通过霍乱毒素的受体，而脱乙酰壳多糖及其衍生物主要是通过NLRP3炎性激活先天免疫。因此，多糖可能具有用作树突状细胞成熟剂的潜力，并进一步在体内用作佐剂。
　　 凝胶多糖硫酸酯的是改性的凝胶多糖衍生物。它们是β-1,3-葡聚糖的多糖，其在吡喃糖环的2、4或6个末端碳上被硫酸基团修饰，具有不同的取代度。凝胶多糖的硫酸盐修饰可以克服凝胶多糖不溶于水，醇和其他常用溶剂的问题。据报道，硫酸缩聚多糖抑制HIV-1gp120与CD4细胞的结合以及gp120诱导的肿瘤坏死因子-α的产生，从而抑制艾滋病感染。出国看病服务机构的研究还发现硫酸缩聚多糖通过抑制乙肝病毒粘附于宿主细胞的过程而具有抗乙肝感染的活性。已证明硫酸缩聚多糖具有体外免疫调节活性，例如促进小鼠脾淋巴细胞的增殖，吞噬作用以及巨噬细胞中白细胞介素-6，白细胞介素-1β和肿瘤坏死因子-α等细胞因子的产生，并诱导巨噬细胞的凋亡。树突状细胞中白细胞介素-12和白细胞介素-6的成熟和产生。因此，出国看病服务机构将硫酸缩聚多糖作为重组乙型肝炎疫苗的佐剂用于疫苗接种的小鼠，发现通过添加硫酸缩聚多糖佐剂，接种疫苗的小鼠的血清抗乙肝抗体水平显着提高，并且小鼠产生了辅助T细胞型免疫应答，与铝佐剂产生的Th2型免疫反应不同。
　　 因此，在本研究中，出国看病服务机构制备了四种分子量和硫酸化度不同的硫酸缩聚多糖，分别为硫酸缩聚多糖1，硫酸缩聚多糖2，硫酸缩聚多糖3和硫酸缩聚多糖4。比较这四种化合物的免疫调节活性后，选择硫酸缩聚多糖3作为佐剂以激活树突状细胞疫苗来治疗肝癌模型小鼠。出国看病服务机构发现硫酸缩聚多糖激活的树突状细胞疫苗显着延长了小鼠的存活时间，减轻了肿瘤负担，并抑制了肿瘤的生长。小鼠肿瘤组织的检测显示硫酸缩聚多糖佐剂激活了树突状细胞疫苗，增加了CD80，组织相容性复合物I和组织相容性复合物II的表达，促进了CD8T细胞浸润增强了肿瘤坏死因子-α和干扰素-ｙ的转录，并降低了TGF-β的转录。还研究了硫酸缩聚多糖作用于树突状细胞成熟的分子机制，发现硫酸缩聚多糖主要通过TOLL样受体4和TOLL样受体2信号通路激活树突状细胞。
　　 小鼠骨髓来源的树突状细胞的制备是根据先前的描述进行的，只是做了一些小改动。简而言之，在无菌条件下分离雄性小鼠的股骨和胫骨。通过用冲洗从股骨和胫骨获得骨髓细胞。使用细胞筛和红细胞裂解缓冲液从骨髓细胞中去除组织和红细胞。然后，将细胞在含有50ng每毫升GM-硫酸凝胶多糖F和IL-4、10％热灭活的FBS和青霉素-链霉素-庆大霉素的RPMI1640培养基中培养。在第3和5天，除去一半含有非贴壁细胞的培养基，并加入如上所述的新鲜培养基。在第7天，收获半连续悬浮细胞作为小鼠骨髓来源的树突状细胞。
　　 硫酸化改性提高了凝胶多糖的溶解度，因此可以扩大硫酸化凝胶多糖衍生物的用途。先前已经研究了硫酸化凝胶多糖的抗艾滋病感染活性。硫酸化多糖表现出多种生物活性，如抗病毒，抗炎，抗凝血，免疫调节和抗肿瘤活性。出国看病服务机构想知道出国看病服务机构准备的所有是否都具有免疫调节活性，并且可以用作免疫佐剂。同时，出国看病服务机构想确定硫酸凝胶多糖-硫酸凝胶多糖4的构效关系，以及硫酸化程度或分子量是否对其免疫调节活性有影响。比较硫酸凝胶多糖，硫酸凝胶多糖和硫酸凝胶多糖的免疫调节活性，结果表明，与未刺激的小鼠骨髓来源的树突状细胞相比，硫酸凝胶多糖，硫酸凝胶多糖或硫酸凝胶多糖处理后CD40和主要组织相容性复合物II的平均荧光强度呈剂量依赖性增加;但是，硫酸凝胶多糖，硫酸凝胶多糖或硫酸凝胶多糖在促进CD40和主要组织相容性复合物II表达方面没有显示显着差异。
　　树突状细胞是先天免疫系统中最有效的抗原呈递细胞，并已被用作肿瘤疫苗以引发抗肿瘤免疫反应。单独的肿瘤抗原，包括完整的自体或异体癌细胞裂解物，可以向树突状细胞传递抗原信息，但使树突状细胞成熟的能力较弱，而未成熟的树突状细胞无法有效激活T细胞。因此，需要适当的佐剂来制备成熟的树突状细胞疫苗。但是，临床上尚无统一的佐剂被批准。促炎细胞因子，如肿瘤坏死因子-α和前列腺素-2，细菌类毒素，如鞭毛蛋白，和TOLL样受体激动剂诸如脂多糖是在研究中最常用的树突状细胞成熟试剂。然而，这类佐剂可以作为具有强免疫原性的抗原而与肿瘤抗原竞争，并最终引起针对佐剂抗原的免疫应答。为了克服这个问题，正在研究和开发新型的免疫刺激剂。其中，天然多糖如脱乙酰壳多糖，β-D-葡聚糖和菊粉，其具有免疫刺激活性，但免疫原性弱，在许多研究显示优越性。在出国看病服务机构先前的研究中，出国看病服务机构发现硫酸缩聚多糖具有体外免疫刺激活性，包括增强巨噬细胞的吞噬能力释放并促进树突状细胞的成熟。当用作乙肝疫苗佐剂时，硫酸缩聚多糖显着增加了乙肝表面抗原特异性抗体的产生，并诱导了明显的偏向Th1的免疫反应。因此，在这项研究中，出国看病服务机构将硫酸缩聚多糖用作树突状细胞疫苗免疫刺激剂，以研究硫酸缩聚多糖是否有潜力在抗肿瘤免疫治疗中发展为树突状细胞疫苗的佐剂。出国看病服务机构制备4种硫酸缩聚多糖的与不同的含量和分子量，并筛选免疫调节作用的体外。所有硫酸缩聚多糖均以含量依赖性的方式增强了树突状细胞中脾细胞的增殖以及成熟标记CD80和CD86的表达。即含量越高，免疫调节活性越强。因此，出国看病服务机构认为硫酸缩聚多糖的含量在不同硫酸缩聚多糖的免疫调节活性中起着比分子量更重要的作用。因此，在抗肿瘤研究中，使用了具有最高含量的硫酸缩聚多糖3来增强树突状细胞疫苗。出国看病服务机构发现，树突状细胞TCL硫酸缩聚多糖疫苗强烈抑制了肿瘤的生长，并延长了荷瘤小鼠的存活时间，这与树突状细胞TCL脂多糖疫苗相当。
　　 肿瘤组织的免疫组织化学染色结果显示，树突状细胞TCL硫酸缩聚多糖和树突状细胞TCL脂多糖疫苗组的肿瘤组织中CD8，CD86，组织相容性复合物I和组织相容性复合物II的表达高于其他组，表明肿瘤微环境中较高的CD8T细胞浸润。组织相容性复合物分子和CD86分别构成信号1和2，以激活溶细胞性T淋巴细胞。信号1和2可以使CD4T细胞极化为1型免疫，并使CD8T细胞能够有效产生细胞毒性反应。因此，树突状细胞TCL硫酸缩聚多糖疫苗诱导的CD8，CD86，组织相容性复合物I和组织相容性复合物II的高表达表明强烈的抗肿瘤免疫应答。此外，在肿瘤组织中，与对照组相比，树突状细胞TCL硫酸缩聚多糖和树突状细胞TCL脂多糖疫苗组的肿瘤坏死因子-α和干扰素-ｙ的mRNA水平上调，而TGF-β的转录则下调。其他组。这些结果表明，树突状细胞TCL硫酸缩聚多糖疫苗可以明显增加肿瘤微环境中抗肿瘤免疫反应的免疫促进因子，同时降低其免疫抑制因子。这可能有利于打破肿瘤微环境中的免疫耐受性并引发自发的抗肿瘤免疫攻击。
　　 β-葡聚糖可被受体和清除剂受体识别，以激活先天免疫系统。据报道，霍乱毒素，TOLL样受体4和C型凝集素受体可以识别β-葡聚糖，而霍乱毒素被认为是β-葡聚糖的主要受体。专家发现，柯德兰可与霍乱毒素结合并与TOLL样受体2和TOLL样受体4协同作用，从而激活单核细胞和巨噬细胞并增强肿瘤坏死因子-α和白细胞介素-10的产生。一些人的报告说，柯德兰通过霍乱毒素和TOLL样受体4信号传导激活树突状细胞，并在基于树突状细胞的癌症免疫治疗中显示出辅助作用。在出国看病服务机构的研究中，出国看病服务机构发现硫酸缩聚多糖可能通过识别树突状细胞表面上的TOLL样受体4和TOLL样受体2表达来激活树突状细胞，并且在激活实验中，TOLL样受体4的影响比TOLL样受体2强。通过MyD88-TAK1-MAPK-NF-κB或TRIF-IRF3-NF-κB信号通路激活TOLL样受体4和通过MyD88-NIK-IKK-NF-κB信号通路激活TOLL样受体2可导致白细胞介素-1β，白细胞介素的产生-6，白细胞介素-10，白细胞介素-12，白细胞介素-13，肿瘤坏死因子-α和干扰素类型1诱导抗感染或抗肿瘤免疫反应。因此，由TOLL样受体2或4激活介导的特定硫酸缩聚多糖诱导的下游信号转导途径和细胞因子表达需要进一步研究。值得一提的是，出国看病服务机构先前的研究发现硫酸缩聚多糖可以通过表面等离振子共振技术与霍乱毒素结合，但在阻断霍乱毒素后，出国看病服务机构在CD80，CD86和CD40的表达上没有发现显着差异。出国看病服务机构假设不同的结果可能是由两个实验中制备的硫酸缩聚多糖的不同含量引起的。当含量增加时，结合亲和力显着降低，亲和力显示为硫酸缩聚多糖小于硫酸缩聚多糖小于硫酸缩聚多糖，而具有14.3％含量的硫酸缩聚多糖不与霍乱毒素结合。出国看病服务机构认为，含量对硫酸缩聚多糖和霍乱毒素之间的结合亲和力有很大影响。广泛的硫酸根可能对电荷分布有显着影响，并改变硫酸缩聚多糖的β-1,3-葡聚糖骨架的空间构象，最终可能影响硫酸缩聚多糖的受体结合倾向。
　　 总之，出国看病服务机构制备了四种具有不同含量和分子量的硫酸缩聚多糖。在体外筛选其免疫调节作用后，出国看病服务机构发现树突状细胞T细胞受体硫酸缩聚多糖疫苗可显着抑制荷瘤小鼠的肿瘤生长并提高其存活率，并且硫酸缩聚多糖可能通过TOLL样受体2和TOLL样受体4信号通路激活树突状细胞。出国看病服务机构的结果为进一步研究硫酸缩聚多糖的免疫佐剂作用和作用机理提供了基础，并且为将来的抗肿瘤免疫疗法研究提供了新的思路。