外泌体生物标志物在乳腺癌患者诊断和预后中的作用

　　乳腺癌是最常见的肿瘤之一，癌症相关死亡的妇女的主要原因世界各地的。早期乳腺癌的5年生存率是99％，但是在远处转移的患者中只有24％，因此早期发现非常重要。此外，对于具有相同TNM分期的患者，即使提供相同的治疗方法，患者也可以从治疗中受益，而其他患者则可能患有肿瘤复发或转移，因此仍然很难准确地预测每个患者的治疗结果。由此，出国看病网可以理解，需要用于乳腺癌的早期诊断和预后的新标记。外来体是由各种细胞类型分泌内涵体衍生的纳米尺寸小泡。在各种肿瘤模型系统中，外来体可从原发性肿瘤细胞既微环境和远处器官转移，导致肿瘤侵袭和转移。在临床中，一些特定的含外泌体的膜标志物被用作乳腺癌的早期诊断和预后的生物标志物。在这里，出国看病网在研究中搜索了已发表的论文，并对这一领域进行系统的综述。
　　 使用MEDLINE，EMBASE和Cochrane对照试验中央注册簿的数据，进行了截至2017年7月1日的检索工作。系统评价的方法和报告遵循PRISMA准则。使用以下关键词标识文章：“或或或或或”和“”。搜索仅限于以英文发表的人类文章。在每个研究中，要求10例以上的患者减少临床选择偏倚。搜索工作由两位作者进行。感兴趣的结果指标包括：外泌体生物标志物，化疗耐药性，总生存期，无病生存期，无进展生存期，乳腺癌的复发和转移。还记录每项研究的其他信息：第一作者的姓名，发表的年份，研究的原始国家，研究时间或随访时间，患者的数量和详细信息，外泌体的纯化和鉴定方法。如果研究中未报告上述类别的数据，则将项目用作“未报告”。提取后，由两位作者对数据进行审查和比较。根据搜索策略，总共审查748条文章。由于重复，排除211篇文章，而排除490篇文章，这是因为在审查标题和摘要后与乳腺癌外泌体的临床研究无关。全文评审了47篇，最后纳入11篇。由于这些研究在患者选择和基线特征方面是异类的，因此进行系统的审查，这不允许进行定量的荟萃分析。所有这11项研究均在2015年至2017年之间发表。其中，中国研究人员领导四项研究，美国领导三项研究，韩国，日本，意大利和西班牙的研究人员分别领导了一项研究。包括一项队列研究，七项病例对照研究和三项病例系列。其中，与诊断有关的有五个，与预后有关的有六个。
　　 对于外泌体纯化，超速离心是最常用的方法。获得患者血浆并去除细胞碎片，然后使用超速离心获得外泌体沉淀。共用条件是十万克2小时，150000克4小时之间。纯化外泌体的其他方法包括外泌体提取试剂盒和免疫磁捕获。对于外泌体鉴定，通常使用透射电子显微镜，因为单个外泌体的直径为30-150nm，并且只能通过TEM直接观察。但是，当外泌体由特殊制造商用珠子包被时，也可以通过免疫荧光和流式细胞仪间接检测到它们。一旦在外周血样品中鉴定出外泌体，酶联免疫吸附测定和定量逆转录聚合酶链反应是检测某些特定外泌体生物标记物的常规方法。此外，还使用其他新技术，包括微流控芯片和自适应动态人工多配体靶向技术。在这项研究的五项研究中，乳腺癌患者外泌体生物标志物的表达明显高于健康对照或良性乳腺肿瘤患者，这表明这些生物标志物可用于诊断乳腺癌。通过PCR，蛋白质印迹或FCM检测的外泌体生物标志物不仅用于诊断，还可以用于预测乳腺癌患者的预后。例如，外泌体中谷胱甘肽S-转移酶P1和泛素羧基末端水解酶-L1的较高表达与接受化疗的患者较低的部分或完全缓解率有关。外泌体蛋白和miRNA与肿瘤复发或远处器官转移有关。此外，瞬时受体电位通道5和mRNA与患者的PFS，DFS和OS相关。
　　 为了使乳腺癌的诊断，需要以下步骤，其获取历史，执行体格检查，实验室服用或附件检查和病理检查。即使对于难以做出鉴别诊断的复杂病例，穿刺活检或肿瘤切除也可以用作金标准。所以，诊断为乳腺癌不是非常困难的，比较的胸内或腹腔内肿瘤状况。但是，对于乳腺癌患者的随访，应定期监测血液实验室测试和辅助检查，但是有时检测到CA153或CA125升高的水平为时已晚，因为转移可能已经在此时。因此，寻找新的早期诊断乳腺癌复发或转移的指标很重要。外泌体是细胞主动分泌的小膜囊泡。由于外泌体在外周血中是稳定的，它们是表征肿瘤行为的有前途的肿瘤来源材料，因此可以监测外泌体，并将外泌体衍生的蛋白质和RNA进一步用于乳腺癌的早期诊断。乳腺癌患者中外泌体生物标志物的表达与健康供体或患有良性乳腺肿瘤的患者中的显着不同，因此这些生物标志物将来可能在临床中使用。一个问题是作为诊断工具，灵敏度和特异性是要评估的两个主要标准，但是，没有研究表明外泌体生物标志物的敏感性和特异性，因此需要进行进一步的研究工作以评估这两个标准。另一个问题是，多年以来，CA153和CA125已经被确立为乳腺癌的标志物，可用于早期诊断和检测复发与转移，如果外泌体生物标志物可以代替血液实验室检测，那么敏感性和特异性应该是至少相同的水平。近年来，其他外围血液测试也可用于早期诊断的临床研究，这样做的好处和缺点可以循环肿瘤细胞或DNA和之间进行比较未来的外泌体生物标志物。
　　 乳腺癌的异质性导致以下事实：即使具有相同TNM分期的患者也接受相同的治疗，有时他们的预后也有所不同，因此预测谁将从治疗中受益非常重要。例如，对于某些由于局部淋巴结浸润而无法进行根治性切除术的患者，新辅助化疗后可减轻肿瘤负担，但对于其他患者，给予新辅助化疗后甚至可能进展为肿瘤。因此，在这种情况下，外泌体生物标志物可能会进行测试，以确定谁将从新辅助化疗中受益，其余患者将选择其他合适的治疗方法，例如手术后进行放射或内分泌治疗。与OS和DFS有关的肿瘤复发和转移是反映患者预后的重要因素。与原位乳腺癌相比，具有浸润性肿瘤的患者复发和转移的风险更高，应该更频繁地进行监测。有方法来评估这样的危险因素，如基因的检测，但现在只基因的小的数目已被确定，并且成本是比较高的。与基因评估相比，外泌体生物标记物更易于测试且成本更低，因为这些标记物主要是蛋白质和RNA，可以通过常规的蛋白质印迹，FCM和PCR分析法进行检测。尽管外泌体生物标志物在诊断和预后方面具有优势，但仍需要解决一些问题。例如，通过超速离心或提取试剂盒纯化外泌体后，可能还会存在其他大小相似的囊泡，从而干扰生物标志物的检测。需要更多的临床研究以建立外泌体生物标志物与诊断和预后之间的强相关性，并且将来还应阐明外泌体生物标志物的敏感性和特异性。在这项研究中，出国看病网审查了外泌体生物标志物的纯化和鉴定的临床方法，以及对乳腺癌患者的早期诊断和预后的影响。将来，仍需要对将外泌体生物标志物与临床常规指标进行比较的大型随机对照试验进行全面评估。