免疫疗法靶向T细胞恶性肿瘤

　　值得注意的是，嵌合抗原受体疗法有严重的毒性。细胞因子释放综合征是全身性炎症反应，由输注后强大的T细胞活化引起。白介素-6是一种促炎细胞因子，在细胞因子释放综合征期间会大量分泌。在特别严重的细胞因子释放综合征病情期间，使用白介素-6R拮抗剂单克隆抗体白介素快速有效地扭转了小儿患者的症状。此后，白介素已被食品和药物管理局批准用于治疗嵌合抗原受体T细胞诱导的危及生命的细胞因子释放综合征。嵌合抗原受体T细胞输注后也有神经毒性的报道。然而，预防性方法仍然难以捉摸。与细胞因子释放综合征和神经毒性相比，靶向B细胞恶性肿瘤的嵌合抗原受体T细胞疗法的治疗结果要容易得多，其结果是B细胞发育不良。由于针对B细胞抗原的记忆细胞形成，这可能是终生的结果。但目前是通过定期输注静脉注射免疫球蛋白来控制的。不幸的是，这对于T细胞恶性肿瘤而言是极其成问题的结果，因为持续的T细胞发育不良会危及生命。目前有使用嵌合抗原受体T细胞200个临床试验登记在美国进行。然而，这些试验中的大多数正在招募患有B细胞恶性肿瘤的患者。在将嵌合抗原受体T细胞疗法扩展至其他癌症的治疗，并在降低难度和降低生产成本的同时，将与治疗相关的毒性降至最低的进展正在取得进展。
　　 已经建立了将T细胞的细胞毒性和重定向到恶性B细胞的方法，但是对T细胞进行重新编程以杀死恶性T细胞，而保留正常的T细胞则更为复杂和具有挑战性。这就要求抗原在恶性T细胞上异常表达，而在正常T细胞上却不存在或表达水平非常低。嵌合抗原受体疗法需要从恶性T细胞中分离出健康的T细胞，这是一个复杂的过程，可能导致产物污染和随后的肿瘤细胞嵌合抗原受体修饰。另外，靶向抗原在嵌合抗原受体T细胞上的表达导致杀伤和嵌合抗原受体T细胞的有限扩增。此外，靶向正常T细胞上正常表达的抗原会导致T细胞发育不良，从而导致严重的免疫抑制。
　　 各种方法已被用来克服这些挑战，包括CRISPR-Cas9基因组编辑从嵌合抗原受体T细胞除去的抗原体外扩增期间，四环素-OFF表达系统限制自相残杀，蛋白表达阻断剂保留抗原在高尔基体，以防止细胞表面表达，或使用嵌合抗原受体-改性的天然杀伤细胞，而不是T细胞。此外，迄今为止，四个目标已被研究作为用于T细胞恶性肿瘤的治疗中嵌合抗原受体T细胞治疗的靶与限制到不表达在T细胞中，分别是CD30，CD37，T细胞受体Β常数1和的CD1a。文中总结了将嵌合抗原受体技术应用于T细胞恶性肿瘤的三个主要挑战的潜在解决方案，即杀人，T细胞发育不良和产品污染。同时列出了当前针对T细胞疾病的所有基于嵌合抗原受体的临床试验清单。下面，出国看病服务人员回顾了针对根据目标靶抗原分类的T细胞恶性肿瘤的所有临床前和临床嵌合抗原受体研究。
　　 CD5表达被限制在正常的T细胞和B细胞的一个小亚群，称为B-1A细胞。CD5充当T细胞受体信号的负调节剂，并具有在防止自身免疫作用。CD5上许多T细胞恶性肿瘤，特别是T细胞急性淋巴细胞白血病和周围T细胞淋巴瘤，使其的良好靶标为嵌合抗原受体性T细胞疗法高度表达。由于T细胞上CD5的表达约为B细胞上的十倍，低亲和力，高亲合力嵌合抗原受体靶向CD5可以避开CD5阳性的B细胞而选择性杀死T细胞。此外，与外周血T细胞相比，CD8+肿瘤浸润淋巴细胞表达的CD5水平较低，一项研究表明CD5的下调可提高T细胞裂解恶性细胞的能力。CD5先前靶向如使用免疫毒素共轭的CD5单克隆抗体在临床试验中抗原的肿瘤，与患者的皮肤T细胞淋巴瘤和T细胞急性淋巴细胞白血病看出响应。
　　 临床前研究表明，带有CD28共刺激域的CD5-嵌合抗原受体的表达导致嵌合抗原受体T细胞中CD5的表面下调，从而允许CD5-嵌合抗原受体T细胞扩增。在两种不同的CD5阳性T细胞急性淋巴细胞白血病模型中，这些细胞对两种T细胞急性淋巴细胞白血病细胞系和原代T细胞急性淋巴细胞白血病细胞具有明显的体外细胞毒性，并延迟了白血病的进展。基于这些结果，正在对患有复发性或难治性T细胞疾病的患者进行CD28共刺激域的CD5-嵌合抗原受体T细胞试验。出国看病服务人员的小组在使用CD5-嵌合抗原受体转导之前，使用CRISPR-Cas9敲除了原代T细胞中的CD5表达。出国看病服务人员发现效应嵌合抗原受体T细胞中CD5的基因编辑增加了嵌合抗原受体表面表达并降低了自我激活。预测增加的嵌合抗原受体表面表达将增强嵌合抗原受体T细胞的抗肿瘤功效。出国看病服务人员还显示了对血管活性肠肽信号的拮抗作用以及PI3Kδ途径的抑制增加了CD5-嵌合抗原受体修饰的T细胞的扩增及其对CD5特异性肿瘤细胞系的细胞毒性。化合物的这种组合也证明以延长在体内处理的T细胞的持久性。
　　 有趣的是，在CD5-嵌合抗原受体中使用4-1BB作为共刺激域会产生明显的杀伤作用。结果表明，来自4-1BB内域的肿瘤坏死因子受体相关因子信号上调了细胞间粘附分子1，随后稳定了含有4种分子的CD5-嵌合抗原受体T细胞之间的杀伤性免疫突触。为了限制和控制杀灭杀伤剂的作用，使用了Tet-OFF表达系统，该系统允许使用小分子抑制剂强力霉素控制转基因的表达。在存在强力霉素的情况下，CD5-41BB-嵌合抗原受体T细胞离体扩增，没有杀伤剂的迹象，同时保持了更为幼稚的基因型。在将CD5-41BB-嵌合抗原受体T细胞注入小鼠体内之前，先从培养物中除去强力霉素，从而在T细胞急性淋巴细胞白血病小鼠模型中产生CD5-嵌合抗原受体表达并改善存活结果。
　　 或者，出国看病服务人员在自然杀伤-92细胞中表达CD5-嵌合抗原受体，自然杀伤-92细胞是一种白介素2依赖性自然杀伤细胞系，本质上是CD5阴性。出国看病服务人员的数据表明，CD5-嵌合抗原受体改性自然杀伤-92细胞具有增加的对T细胞白血病细胞系的细胞毒性相比于幼稚自然杀伤-92细胞的细胞毒性，并且在T细胞急性淋巴细胞白血病的生存显著改善异种移植小鼠模型与未用过自然杀伤-92细胞治疗的小鼠的存活率相比。该数据证实了先前发表的数据，该数据表明与用对照自然杀伤-92细胞治疗的小鼠相比，用CD5-嵌合抗原受体修饰的自然杀伤-92细胞治疗的经辐照的T细胞急性淋巴细胞白血病小鼠模型的存活率显着提高，并且肿瘤减少率提高。最近，另一个研究小组在其嵌合抗原受体构建体中使用自然杀伤特异性共刺激域2B4对CD5-嵌合抗原受体修饰的自然杀伤-92细胞进行了测试。有趣的是，在体外和体内实验中，CD5-2B4-嵌合抗原受体自然杀伤-92细胞均优于CD5-41BB-嵌合抗原受体自然杀伤-92细胞。
　　 T细胞表达α、βT细胞受体；β链可以由被编码的T细胞受体β常数1基因或基因T细胞受体Β常数2。因此，T细胞受体Β常数1和T细胞受体Β常数2的表达是互斥的。此外，CD4和CD8阳性T细胞群体均表达亚群，而对常见病毒具有特异性的CD8阳性T细胞群体也同时含有T细胞受体Β常数1和T细胞受体Β常数2细胞。但是，随着恶性T细胞从单个细胞发展而来，整个癌细胞群将呈T细胞受体Β常数1或T细胞受体Β常数2阳性。已经通过流式细胞仪分析了许多T细胞恶性细胞系和原代样品，以验证恶性细胞群中β链表达的同质性。许多癌细胞下调了α、βT细胞受体。但是，它在>95％的周围T细胞淋巴瘤和>30％的T细胞急性淋巴细胞白血病中表达。
　　 抗T细胞受体Β常数嵌合抗原受体T细胞对经T细胞受体Β常数1转导的JKOT细胞系表现出特异性和有效的细胞毒性，但对未转导的细胞或经T细胞受体Β常数2转导的细胞，即使在混合人群中也没有。此外，在来自T细胞恶性肿瘤患者的主要样本中，抗T细胞受体Β常数嵌合抗原受体T细胞保留了大量健康T细胞，从而规避了嵌合抗原受体T细胞治疗T细胞恶性肿瘤的局限性。在使用T细胞受体Β常数阳性JurkatT细胞建立癌症的小鼠模型中，用抗T细胞受体Β常数嵌合抗原受体T细胞治疗的小鼠表现出降低的肿瘤负担和延长的生存期。在其他的临床前研究中，向小鼠注射T细胞受体Β常数1和T细胞受体Β常数2癌细胞，然后分别用纯净T细胞或抗T细胞受体Β常数嵌合抗原受体T细胞进行治疗。在用抗T细胞受体Β常数嵌合抗原受体T细胞治疗的小鼠中未检测到T细胞受体Β常数阳性的JurkatT细胞。然而，鉴定出T细胞受体Β常数2阳性细胞。这与用幼稚T细胞治疗的小鼠相反，该小鼠的骨髓证实了T细胞受体Β常数阳性和T细胞受体Β常数2阳性细胞的存在。因此，靶向T细胞受体Β常数阳性恶性细胞提供了避免T细胞再生不良的独特方法，这是许多提议的嵌合抗原受体T细胞疗法用于治疗T细胞恶性肿瘤的结果。