在中枢神经系统中，脑胶质瘤是最具侵袭性的恶性肿瘤，其患病率高，复发率高，生存率低。传统上，神经胶质瘤的治疗主要基于手术，然后是放射疗法或化学疗法。然而，其失败经常发生，治疗效果可能使患者的预后更差。这可能归因于治疗后神经胶质瘤残留的持续增殖，最终导致神经胶质瘤复发。总体而言，短期生存率较低，接受神经胶质瘤诊断的中位时间为1-2年。因此，对于神经胶质瘤患者来说，迫切需要开发新的有效药物。替莫唑胺是临床上治疗脑肿瘤最有效的药物之一，是一种含有咪唑四嗪环的烷基化剂。TMZ被认为对黑色素瘤，淋巴瘤，白血病和实体瘤具有显着的治愈作用。TMZ很容易穿透血脑屏障，进一步延迟了神经胶质瘤的复发。DNA的烷基化发挥细胞毒性作用，产生单链或双链DNA，断裂以阻止DNA复制，然后产生抗肿瘤作用。此外，TMZ通过诱导不依赖于DNA损伤的应激反应来介导细胞凋亡。患者需要高剂量的TMZ，这反过来又表现出明显的毒性副作用。仍然主要关注降低毒性，提高敏感性和改善TMZ的治疗效果。联合治疗对改善肿瘤细胞的致死作用具有重要的临床意义。
　　 与传统的化学疗法药物相比，中药在多效性，多靶点，多途径和广泛的特征上更具参与性。Astragalinaaustralis是一种传统中药，含有多种类型的生物活性化合物，例如各种类黄酮，糖苷和其他物质，有益于生命机能和诱导利尿作用以减轻水肿。在实践中，Astragalinaaustralis通常以各种复杂的处方配方与其他草药结合使用。黄芪在抗肿瘤方面的可靠作用。尽管澳洲黄芪通常与其他草药合用，但也可以单独服用。在各种药理研究中，黄芪的粗提物和单体成分均显示出抗肿瘤，抗氧化，抗感染，心脏保护和抗病毒的活性。Calycosin和formononetinFMN是高效液相色谱结合光电二极管阵列检测和电喷雾电离检测证明的存在于黄芪中的成分。Calycosin和FMN均具有抗炎，抗免疫，抗氧化，抗病毒，抗肿瘤等药理作用。它们可以通过抑制细胞的增殖和迁移以及促进细胞凋亡而被用作临床神经保护的潜在药物。calycosin和FMN在乳腺癌，黑色素瘤和宫颈癌的治疗中起着关键作用。结果表明，calycosin和FMN可以抑制神经胶质瘤细胞的生长并促进其凋亡。FMN与TMZ的组合归因于对神经胶质瘤的协同治疗作用。从结论中得出的启示是，与更多类黄酮类药物共同治疗可能进一步有益于TMZ。
　　 使用C6细胞共同处理三种药物对体外增殖，凋亡和迁移的影响。还建立了小鼠异位肿瘤模型，以测试两种中药和TMZ联合治疗胶质瘤的体内效果。此处的实验研究揭示了TMZ在神经胶质瘤治疗中的关键作用，这可能为神经胶质瘤研究提供了新途径。通过MTT分析评估了不同浓度的TMZ，calycosin和FMN对C6细胞48小时的细胞毒性。用递增剂量的TMZ处理C6细胞48小时。用20–320uMFMN处理可在C6细胞中以浓度依赖的方式抑制细胞增殖。FMN的最小有效浓度为40uM。当对细胞进行calycosin或FMN的组合处理时，其中包含低有效浓度的calycosin和FMN以及各种浓度的TMZ48h，与TMZ共同处理的IC降低。这表明calycosin和FMN可以提高TMZ的敏感性。
　　 进行H＆E染色测定以检测细胞的凋亡水平和形态变化。基于MTT，分别用calycosin和FMN或与TMZ联合治疗C6细胞48小时。用TMZ处理后，凋亡细胞的赋能减少，细胞核略微萎缩。当将C6细胞用TMZ结合calycosin或FMN处理后，活细胞的数量显着减少。在TMZ与花胶蛋白或FMN结合的样品中观察到更大的核收缩。在TMZ，钙黏蛋白和FMN的组合处理中，C6细胞表现出大多数的核细胞凋亡变化，其包含核浓缩和聚集。当与花胶蛋白和FMN结合使用时，TMZ对C6细胞产生抑制作用。为了测试calycosin和FMN是否可以提高TMZ减少胶质瘤细胞运动性和迁移的功效，分别用calycosin和FMN或与TMZ联合处理C6细胞24小时，并经历了伤口愈合和transwell迁移。用TMZ处理后，细胞迁移的抑制作用较弱。当细胞暴露于与calycosin或FMN结合的TMZ时，细胞迁移率明显降低。发现用TMZ结合花胶蛋白和FMN处理的细胞很少迁移。由于诱导了大量凋亡，随后通过流式细胞术通过膜联蛋白染色确定了calycosin和FMN是否可以提高TMZ促进肿瘤细胞凋亡的治疗效果。结果表明，TMZ结合花胶蛋白和FMN可以很好地提高细胞凋亡率。
　　 为了测量药物组合对细胞增殖和凋亡的影响，当前的研究还检测了凋亡相关蛋白的表达水平。经TMZ处理的C6细胞在Bax，鉴于TMZ结合花胶蛋白和FMN组，Bax的表达水平。为了验证药物组合对细胞迁移的影响，目前的研究还检测了迁移相关蛋白的水平。与对照组相比，经TMZ处理的C6细胞迁移相关蛋白水平略有下降。用TMZ结合花胶蛋白，FMN或两者结合处理的C6细胞的迁移相关蛋白水平低于TMZ单一疗法的水平。与其他治疗方法相比，TMZ结合花胶蛋白和FMN的迁移效果最佳。calycosin和FMN可有效增加TMZ诱导的C6细胞凋亡和迁移。使用C6异种移植小鼠模型进一步检测TMZ，calycosin和FMN组合的抗癌活性。单独给予TMZ或与calycosin，FMN或同时给予TMZ后，未观察到组织的病理变化。这些数据没有显示出对所有药物施用组的任何明显的毒性。给药组的肿瘤密度显着小于对照组，并且三药联合组的效果最好。为了进一步验证动物模型中的分子变化，通过免疫组织化学检测了肿瘤组织的相关蛋白。GFAP在所有组中都有明确表达。凋亡蛋白的表达上调，而迁移蛋白的表达下调。
　　 脑胶质瘤是中枢神经系统中常见的恶性原发肿瘤，约占颅内肿瘤的40％。快速增殖和强侵袭性是神经胶质瘤的特征。早期没有明显的临床特征。随着恶性程度的增加，出现诸如颅内压升高，头晕，视力下降和恶心的症状。常规手术切除不能完全治愈，导致其预后差和容易复发。近年来，神经胶质瘤的治疗范围广泛，包括中药，外科手术，放疗，化学疗法，伽玛刀和X刀。手术和放疗后，有效的抗肿瘤药物的给药更有利于患者的康复和预后。TMZ被确定为治疗神经胶质瘤的广谱抗肿瘤药物。尽管TMZ具有抗肿瘤作用并且可以为改善患者的生活质量做出贡献，但其对患者的有效治疗率仅为约40％。患者的长期存活率被认为是低的。高增殖率和活动性不利于神经胶质瘤患者的预后。因此，通过抑制肿瘤细胞的增殖和迁移来增强TMZ的抗肿瘤作用引起了神经胶质瘤治疗的主要关注。为了减少TMZ的剂量，降低毒性并进一步提高其敏感性，海外医疗网的研究人员采用了多种药物联合治疗治疗神经胶质瘤的策略。
　　 为了验证calycosin，FMN和TMZ对C6细胞的作用，研究人员首先进行了MTT分析，并确认这三种药物以剂量依赖的方式显着抑制C6细胞的增殖。通过与花胶蛋白和FMN结合来提高TMZ的疗效。以最低有效浓度的calycosin和FMN与TMZ结合使用。结果显示三种药物的共同给药可以剂量依赖性的方式抑制细胞增殖。其中，最低浓度组的抑制率大于50％。将该组中三种药物的浓度作为实验浓度。增殖阻滞与凋亡密切相关。细胞凋亡在消除癌细胞中起着至关重要的作用。凋亡已成为大多数癌症治疗的关键指标。三种药物的共同给药可增加凋亡细胞的数量。抗凋亡蛋白被下调。HE染色分析显示，用三种药物处理的存活C6细胞数量减少。并且观察到更大的核收缩。
　　 同时，迁移生长是肿瘤难治的另一个重要原因。胶质瘤细胞侵入性生长，并容易扩散到周围的其他组织。MMP-2和MMP-9是代表肿瘤迁移和侵袭的蛋白质生物标记物。注意到在划痕试验和Transwell分析中，细胞伤口的愈合速度和迁移的细胞数量均下降。与仅TMZ给药组相比，联合组中的迁移蛋白下调。研究人员在小鼠皮下植入了C6胶质瘤细胞。H＆E分析显示，联合用药组的肿瘤密度显着稀疏。为了提高神经胶质瘤的治疗效果，研究人员还关注联合用药是否增加了药物对人体组织和器官的毒性。结果表明，每组药物对小鼠心脏，肝脏，脾脏，肺和肾脏的毒性均很小。在免疫组织化学测定中，GFAP在每组中特异性表达。凋亡蛋白的表达上调，而迁移蛋白的表达下调。
　　 总之，通过调节对神经胶质瘤病因至关重要的相关蛋白，并同时施用calycosin，FMN和TMZ可以在体外显着抑制C6细胞的生长和迁移，并抑制异种移植肿瘤中的肿瘤生长。该研究可为神经胶质瘤的临床治疗提供理论依据。