阿霉素抗人神经胶质瘤的功效 |
阿霉素是最有效和广泛使用的化学治疗剂之一,对实体瘤表现出广泛的活性。然而,由于其严重的副作用,如致命的心脏毒性和限制剂量的骨髓抑制,被证明是一把双刃剑。此外,DOX的抗癌功效也可通过由各种药物流出泵驱动的多药耐药性下降,克服化学耐药性,减少不良反应和提高抗癌效率仍然是基于DOX的化学疗法的最大挑战。近来,联合化疗已被认为是一种有前途的策略,寻找新型化学增敏剂非常重要。天然产品包含各种生物活性成分,具有克服MDR,增强抗癌功效和减少不良反应的潜力。冰片主要是由树脂或龙脑香分离。冰片作为萜烯和双环有机化合物已广泛用于食品和药品行业。天然冰片作为一种安全的冰片形式,被广泛用作调味剂和有价值的医疗材料。NB有效地提高的不良可渗透药物的生物利用度通过提高细胞渗透性,血-脑屏障的开口和脑组织中促进药物分布。最近的研究表明,NB具有增强化学药物对人类癌症的抗癌功效的潜力。机制尚不清楚,关于神经胶质瘤中NB介导的化学致敏作用的信息很少。
在体外BBB模型和DOX的细胞内吸收为首次进行的。NB的添加将BBB的渗透性从23.5%显着增加到57.6%。NB的共同处理显着增强了U251细胞中DOX的细胞内摄取。通过MTT测定法检测了DOX和NB的抗增殖作用。用0.1–1UMDOX处理U251细胞48小时以剂量依赖性方式适度抑制细胞增殖。NB对U251细胞没有明显的细胞生长抑制作用。但是,DOX和NB的联合处理显着增强了对U251和U87细胞的生长抑制作用。例如,仅用0.4或0.8UMDOX处理U251细胞仅分别将细胞活力抑制到86.3%和70.1%。NB的共处理有效地增强了DOX诱导的细胞杀伤率,分别达到68.5%和51.3%。细胞数量的减少,细胞的圆化和细胞的收缩都证实了这一结论。综上所述,这些结果表明NB通过增加对DOX的摄取而增强了DOX诱导的人胶质瘤细胞中的抗癌效率。
通过流式细胞术分析探索了由NB和ODX诱导的潜在细胞死亡机制。DOX的共处理和G2期的比例,伴随着的G0峰的相应减小NB显着增加。例如,将细胞单独暴露于0.4和0.8UMDOX会使G2群体分别从4.1%略微增加到13.3%和27.1%。但DOX和NB的共同处理显着提高了G2期阻滞分别至33.6%和49.6%。没有观察到明显的细胞凋亡。为了进一步证实这一假设,通过蛋白质印迹分析了两个重要的细胞周期调节相关蛋白CYCLINB和CDC2。DOX处理仅引起细胞周期蛋白B和CDC2的轻微下调。DOX和NB的联合处理显着增强了细胞周期蛋白B和CDC2的下调。这些结果表明,NB具有通过触发增强的G2细胞周期停滞来增强DOX诱导的细胞生长抑制的潜力。
ROS在调节细胞生长,增殖,迁移和死亡中起关键作用。过量产生的ROS会破坏DNA的各种成分,并调节DNA损伤介导的信号转导。因此,通过测量和可视化对氧化敏感的荧光素DCFH-DA来监测本研究中的ROS生成。NB处理显着增强了DOX诱导的ROS生成,如增强的绿色荧光所示。通过微型阅读器在U251和U87细胞中检测到的ROS生成的定量分析进一步证实了这一结论。通过流式细胞术检查的ROS生成进一步量化了这种作用。ROS的过量产生随后引起DNA损伤。DOX处理明显引起DNA损伤。NB协同治疗有效增强了DOX诱导的DNA损伤,这被磷酸化的ATM,ATR,P53,组蛋白H2A.X和总P21的增强活化所证实。为了证实ROS的重要性,采用抗氧化剂抑制ROS的产生。用5MMGSH预处理细胞可有效减弱DOX诱导的DNA损伤和细胞毒性,这可以通过减弱ATM,ATR,P53和组蛋白H2A.X的磷酸化以及恢复其表达来证明。这些结果表明,ROS作为重要的上游调节剂,有助于联合治疗诱导的抗人类神经胶质瘤生长的抗癌功效。
MAPK和PI3途径通过一系列底物的磷酸化在调节细胞增殖,存活和细胞死亡中起重要作用。因此,本研究通过蛋白质印迹分析检查了MAPKS和PI3K通路的功能障碍。暴露于0.2、0.4和0.8UMDOX的U251细胞未显示JNK和AKT的显着磷酸化,但显示了P38和ERK的剂量依赖性磷酸化和AKT的去磷酸化。但是,NB和DOX的联合治疗显着增强了MAPK和PI3K通路的功能障碍。总的MAPK和AKT没有显示出明显的交替。为了进一步评估MAPK和AKT的作用,使用了MAPK和PI3K途径的特异性抑制剂。用10UMU0126预处理细胞可有效抑制联合治疗诱导的ERK活化和延长的细胞活力。用10UMLY294002预处理细胞可显着增强联合治疗诱导的AKT去磷酸化,并导致更多的细胞杀死。然而,用SP600125或SB203580对细胞进行预处理并未显示出联合治疗诱导的细胞死亡的显着变化。以上这些数据表明,ERK和AKT而非JNK和P38共同导致了治疗诱导的细胞生长抑制。
荷瘤裸鼠被用于评估DOX和NB在体内的协同抗癌作用。治疗肿瘤的裸小鼠2MG/公斤的DOX的减少肿瘤重量和肿瘤体积。NB和DOX的联合治疗对肿瘤生长具有增强的抑制作用。在所有治疗组中均未观察到裸鼠体重明显减轻。此外,还通过蛋白质印迹分析和免疫组织化学染色探索了DOX和NB的体内抗癌机制。根据体外研究,联合治疗在体内显着引起G2细胞周期停滞和DNA损伤分别由下调细胞周期蛋白B和组蛋白磷酸化所证实。IHC染色表明,联合治疗还废除了KI-67和CD34表达,它们分别是细胞增殖和血管生成的关键标志物。这些结果证明,NB通过诱导G2细胞周期停滞和抑制血管生成而增强了DOX的体内抗癌作用。总之发现证实NB具有增强DOX诱导的ROS生成以及MAPK和PI3K通路功能障碍的潜力。ROS过量产生随后激活了DNA损伤,启动了G2期阻滞,并最终导致细胞生长受到抑制。
恶性神经胶质瘤表示最普通的和攻击性的原发性脑肿瘤,破坏周围正常脑组织并引起神经功能障碍。即使各种化学治疗药物已在临床上得到广泛应用,由于其耐药性,副作用和不可接受的血脑屏障,它仍然是一种预后不良的致命疾病。阿霉素是最常用的蒽环类药物之一,已广泛用于治疗各种实体瘤,包括乳腺癌,前列腺癌,卵巢癌,子宫癌,食道癌,胃癌和肝癌。DOX在人脑胶质瘤临床应用是通过BBB发展限于。天然冰片,一单萜天然产物,具有促进药物吸收并打开BBB加速脑组织在药物分布的电位。最近,NB的协同抗癌作用已被广泛的出国看病网研究人员研究。但是,NB敏化基于DOX的化学疗法的机制仍然不清楚。
ROS是在细胞内的信号级联的关键上游引发剂,其调节不同的细胞事件,包括细胞增殖,迁移和凋亡性细胞死亡。化学疗法诱导的肿瘤细胞死亡通常被认为与过量的ROS产生有关。已知DOX会产生ROS作为其抗癌机制的一部分。但使用相同药物进行连续治疗可能会导致ROS产生效率降低,从而导致耐药性。因此,额外的DNA刺激和细胞死亡可能需要额外刺激引起的ROS积累增加。ROS的产生促成NB介导的化疗增敏。在本研究中,NB和DOX的联合治疗诱导了ROS生成的增强,表明ROS参与了NB对人胶质瘤中DOX的致敏作用。过量的ROS可能会破坏DNA,激活ATM并导致各种下游底物的磷酸化,从而触发细胞周期停滞和凋亡。通过结合NB和DOX处理激活了整个DNA损伤信号轴。P53的激活可以上调P21的表达,从而促进G2细胞周期阻滞。抑制ROS通过抗氧化剂可以抑制DOX诱导的细胞死亡。ROS抑制部分抑制了DNA损伤和细胞死亡,表明ROS在NB介导的化学增敏中的重要作用。
MAPK和PI3K途径是在大多数细胞类型主要氧化应激敏感信号转导途径。MAPKS和AKT的异常激活与抗DOX的发生密切相关。因此,在基于DOX的化疗中,靶向MAPKS和AKT可能会增强抗癌功效。NB用的MAPK的激活和抑制AKT的有效提高紫杉醇,硒代胱氨酸和姜黄素的抗癌活性。MAPKS和AKT的功能障碍均可导致联合治疗诱导的针对人胶质瘤的生长抑制。两种激酶的特异性抑制剂进一步证实了它们的作用。本研究探索通过增加BBB渗透性来增加NB对DOX的细胞摄取,并确信NB通过G2细胞周期阻滞增强了DOX诱导的抗癌作用,并证实MAPKS和PI3K的功能障碍导致这种致敏。总之,NB协同增强DOX在细胞内的吸收并迅速激活ROS的过量产生。DOX可以通过直接插入DNA中而引起DNA损伤,并且ROS过量产生转移到细胞核中,以增强DOX介导的DNA损伤。随后,受损细胞启动了G2期停滞,并最终导致细胞生长受到抑制。
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