在体内平衡期间，在体内形成高级糖基化终产物（AGEs），游离还原糖和活性羰基非蛋白质与蛋白质的非酶结合产物。的终产物形成速率已与氧化还原平衡。的AGEs的过度积累发生在病理学状况比如高血糖症。为年龄的细胞表面受体包括用于高级糖化终产物（RAGE），寡糖基转移酶-48（OST-48），清道夫受体I和II型，以及半乳凝素3和80K-H磷蛋白受体。的AGEs和它们的受体之间的相互作用引起的氧化应激和炎症反应中的各种细胞，从而被卷入不同aging-或糖尿病相关疾病，包括心血管疾病，慢性肾脏疾病，骨质疏松症，阿尔茨海默氏病和癌症。AGEs在癌症发生和发展中的作用越来越受到关注。不同癌细胞系的AGE治疗促进细胞生长，迁移和侵袭。由于增加癌症相关死亡的糖尿病患者，这些研究表明，终产物可能代表高血糖与癌症之间潜在的关联机制。研究小组此前曾报道AGEs可增加结肠直肠癌和肝癌晚期细胞的增殖。在结肠直肠癌细胞中，AGEs-RAGE-ChREBP信号传导在增强细胞增殖中起重要作用。然而，AGEs促进肝癌晚期细胞中细胞增殖的机制仍有待阐明。
　　 氧化应激是活性氧（ROS）和抗氧化防御系统之间的不平衡。某些水平的ROS充当信号分子，刺激细胞增殖，凋亡和基因表达。过量的ROS会产生氧化应激，在糖尿病和癌症的发展中起着重要作用。高的AGE水平向增加的ROS产生的糖尿病患者。AGEs与RAGE的结合诱导ROS产生，其反过来调节蛋白激酶C，促分裂原活化蛋白激酶和各种细胞因子和转录因子如FOXO，Nrf2，AP-1和NF-κB的活化。此外，持续的氧化应激可导致不可控的细胞增殖和肿瘤形成。ROS具有高度反应性，可直接损害细胞成分，如DNA，脂质和蛋白质。ROS还可以调节编码参与细胞周期调节，细胞增殖，和细胞凋亡蛋白的许多基因的表达。ROS已经知道在肝癌晚期中发挥重要作用。肝癌晚期的不同诱导剂包括肝炎病毒感染，致癌物质，毒素和类固醇激素具有共同的ROS。ChREBP是编码糖酵解和脂肪生成中关键酶的基因的重要葡萄糖响应转录因子，如L型丙酮酸激酶（L-PK），乙酰辅酶A羧化酶（ACC），脂肪酸合成酶（FAS）和硬脂酰辅酶A.去饱和酶-1（SCD1）在代谢组织和癌细胞中。除转录激活因子外，ChREBP还可作为转录抑制因子，降低许多基因的表达，包括磷酸烯醇丙酮酸羧激酶（PEPCK），葡萄糖-6-磷酸酶（G6Pase），溶质载体家族6成员9（SLC6A9）和tribbles同系物3（TRIB3）。葡萄糖不仅可以增强ChREBPmRNA和蛋白质的表达，还可以通过促进其核转位和DNA结合活性来增加ChREBP的活性。除了经典同种型ChREBP基因（ChREBP基因-α），从一个不同的启动子转录的新鉴定的同种型ChREBP基因-β也由葡萄糖调节。有趣的是，在患有前驱糖尿病或早期2型糖尿病的肥胖青少年中，ChREBP的mRNA水平发生了改变。除了其在糖尿病状况调节新陈代谢功能，ChREBP基因促进有氧糖酵解，合成代谢和增殖在结肠直肠癌和肝癌细胞。研究人员最近报道AGEs诱导的ChREBP上调和活化有助于增加结肠直肠癌细胞中AGE的细胞增殖。
　　 在本研究中，研究人员旨在找出AGEs在调节肝癌细胞增殖中的潜在机制。研究人员在不同的葡萄糖条件下用AGEs治疗肝癌细胞。0mM，5.6mM和25mM葡萄糖分别不代表葡萄糖，生理浓度的葡萄糖和高葡萄糖条件。研究人员发现AGEs通过增加S期群和抑制细胞凋亡来诱导肝癌细胞增殖。AGEs处理增加了肝癌细胞中的ROS产生。抗氧化剂NAC部分阻断AGEs诱导的ChREBP表达和细胞增殖，表明AGEs-ROS-ChREBP途径在促进肝癌细胞增殖中起关键作用。研究人员的研究结果表明，AGEs-ROS-ChREBP途径可能是治疗糖尿病患者肝癌晚期的新靶点。人肝细胞癌HepG2细胞在37℃，湿润的5％CO2气氛下在Dulbecco's改良Eagle培养基（DMEM）中培养，所述培养基补充有0mM，5.6mM或25mM葡萄糖，10％胎牛血清（FBS），100-单位青霉素/mL，100μg链霉素/mL，1mM丙酮酸钠，50μmol/Lβ-巯基乙醇和2mML-谷氨酰胺。如前所述制备AGEs。所有孵育均在无菌条件下进行。通过在磷酸盐缓冲液（0.2M，pH7.4）中将BSA（50mg/mL，Sigma）与D-葡萄糖（0.5M，Sigma）一起温育8周来制备AGEs。温育后，通过对PBS（0.2M，pH7.4）的广泛透析除去未结合的糖。作为阴性对照，在相同条件下将BSA（50mg/mL）在没有D-葡萄糖的情况下孵育8周。使用鲎阿米巴样细胞裂解物（LAL）试剂（AssociatesofCapeCod）测试AGE的内毒素。如果内毒素低于15EU/L，则认为制剂成功。
　　 对于细胞活力分析，将用不同葡萄糖条件培养的HepG2细胞用AGEs或BSA处理72小时。通过MTS测定（Promega）进行细胞活力。如前所述，使用BrdUAPCFlowKit（BDPharmingen）估计细胞周期。在无葡萄糖的DMEM中培养的HepG2细胞用AGEs或BSA处理24小时。对于细胞凋亡分析，在无葡萄糖的DMEM中培养的HepG2细胞用AGEs或BSA处理24小时。如前所述，使用FITCAnnexinVApopotosisDetectionKit（BDPharmingen）进行细胞凋亡。将AGEs加入在补充有0mM或25mM葡萄糖的DMEM中培养的HepG2细胞中，并将细胞再培养24小时。如前所述进行核和细胞溶质分级分离和蛋白质印迹分析。使用以下一抗和二抗：抗ChREBP（Novus）和抗Tubulin（Sigma）抗体，以及二级过氧化物酶标记的抗IgG抗体（SantaCruz）
　　 研究人员还研究了ROS产生是否在介导HepG2细胞中AGEs增加细胞增殖中起重要作用。预处理HepG2细胞与抗氧化剂NAC在HepG2细胞。