有人首次报道了通过检测外周血中的肝细胞或HCC相关AFPmRNA来鉴定循环HCC细胞的特异性的分析。1994年。作者证明，与肿瘤大小和血清AFP浓度相关的血液中AFPmRNA水平显着增加。仅在外周血中具有AFPmRNA的患者中观察到肝外转移。总之，作者得出结论，外周血中AFPmRNA的存在可能是循环恶性肝细胞的有用标志物，可用于预测HCC患者肿瘤细胞的血行转移性扩散。然而，在该研究中，作者未发现升高的AFP水平与CTC之间存在显着相关性。此外，研究人员的后续研究。报道了使用RT-PCR方法检测HCC中CTC中AFPmRNA的结论。他们认为血液中AFPmRNA的存在是HCC患者预后的预测因子。然而，其他研究人员得出了一个相互矛盾的结论，即虽然AFPmRNA可用于检测HCC中循环微转移灶，但外周血中AFPmRNA不是HCC循环微转移的特异性标志物，尤其是在外科治疗的情况下。HCC。根据这些研究，外围AFPmRNA的临床应用还探讨在多个研究中心，并就其意义，因为预后标志依然存在争议。因此，外周血中的其他肿瘤特异性分子包括MAGE-1，MAGE-3，hTERT，GPC-3，CD133，CD90，K19，CD44和PLAC1已经使用RT-PCR研究了循环CTC数量与术后HCC复发之间的直接相关性。虽然目前几项研究的结果表明多个HCC相关基因可用作早期癌症检测，转移评估，预后预测和治疗反应监测的临床生物标志物，尚无广泛认可的指标。问题可能与这些标志物不是HCC特异性的事实有关。此外，基于RT-PCR的分析不能准确地量化CTC的数量，并且不能提供完整的CTC用于进一步的研究。因此，必须在HCC患者中建立其他敏感和特异性的CTC富集和检测方法。
　　 基于与RT-PCR方法不同的原理，ISET技术提供了单个CTC的形态学，免疫细胞学和遗传表征，广泛用于CTC检测。报道了ISET方法首次应用于检测HCC患者的CTC。在2000年。作者认为ISET技术为肿瘤学中的外周血细胞学分析提供了独特的机会，并将免疫形态学研究与新的分析结合起来，以探索个体分离细胞的遗传异常。该CanPatrolCTC分析平台（SurExam，中国）是CTC分离和鉴定。该技术包括两个主要步骤：基于过滤器的分离CTC的方法和随后使用EMT标记物表征CTC，包括上皮标志物EpCAM和CK以及间充质标志物波形蛋白和扭曲。研究人员首次描述了在HCC患者中使用CellSearch系统（CSS）检测EpCAM阳性CTC的可能性。研究人员在切除前和1个月后检测了123例HCC患者的血液样本，并在82例样本中检测到≥1个EpCAM（+）CTC，其中51例患有≥2个EpCAM（+）CTC。他们认为，术前CTC计数≥2是手术后HCC患者肿瘤复发的新预测因子，尤其是AFP水平≤400ng/ml的患者亚组。同样，研究人员在18/59HCC患者中检测到≥1个CTC，发现CTC阳性队列中的OS明显短于CTC阴性队列，因此表明EpCAM阳性CTC在晚期HCC患者中经常可检测到且表现出预后OS和血管侵犯的价值。研究人员的类似研究。在7/20患者中报告≥2个EpCAM（+）CTC，表明EpCAM（+）CTC与AFP水平和血管侵犯之间存在强相关性。随着多个研究中心的不断参与，这些研究表明EpCAM（+）CTC有助于HCC复发，因此可用作HCC患者的新型预后预测因子。然而，只有一小部分HCC细胞表达EpCAM，其仅在约30-40％的患者中鉴定出低数量的CTC。另外，被认为是肝癌晚期癌症转移的起始过程的EMT涉及上皮标志物如EpCAM的丧失，这意味着CSS可能忽略循环的HCC细胞。这些原因限制了在HCC患者中继续使用CSS。研究人员使用流式细胞仪，以确定循环使用的生物标志物，如酷帕1，CK和CPS1HCC细胞和证明了独特磁循环HCC细胞分离系统通过唾液酸糖蛋白受体的（ASGPR）与相互作用介导其配体可用于特异性和有效地检测循环HCC细胞。在研究人员的研究中。，基于核质比率以及EpCAM和CD45，通过成像流式细胞仪分析血液样本中的CTC。作者发现CTC计数与核质比，微血管侵犯（MVI）和HCC预后之间存在密切关联。。随着技术的进步，多标记组合，包括pERK和pAkt，EMT标记物（扭曲和波形蛋白），MAGE-3和生存素，CK，EpCAM和Glypican-3，AnnexinV，EpCAM，ASGPR1和taMPs用于CTC检测，用于评估转移和预后以及监测索拉非尼的疗效。除了上面提到的各种检测方法中，CTC-芯片已被认为有效的微流体装置，用于捕获基于抗体包被的微柱。尽管检测方法的多样性和多分子靶标的重要性，仍然需要多中心试验来证实CTC检测有助于HCC患者未来临床管理的说法。
　　CTC分析可能为临床医生和研究人员提供个性化和有效的策略，因为CTC是敏感的生物标志物，可以进行早期诊断，实时监测和分子表征，以促进精准医学的实施。在一些人报道的荟萃分析中，他们证明CTC检测不推荐作为独立的HCC诊断工具，但与HCC患者的不良临床病理特征相关，并且可能表明预后不良。此外，他们系统地综合了不同的研究结果，为CTC检测的潜在临床价值提供了有力的证据。然而，在临床上应用CTC分析之前，必须克服许多瓶颈。其中一个挑战是检测方法之间的不一致。上述各种CTC检测方法各有优缺点。建立一种能够捕获全部CTC的高灵敏度和特异性方法极具挑战性。因此，用于CTC分析的标准化测定方案，包括样品制备，富集和检测，是至关重要的。此外,大多数研究是单中心病例对照研究,样本量有限。验证有时很难，如果不是完全不存在的话。需要进行具有足够样本量和长期随访的多中心前瞻性研究,以评估CTC检测方法。在多中心研究中，检测方法一致，大样本可以为最终数据的准确分析和标准评估提供强有力的验证。尽管CTC检测目前仅用于研究，但技术的不断进步将使其在不久的将来在临床实践中可行。